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內源性內參,你應該了解更多

內參,即是在檢測細胞內分子表達變化時選擇的參照物,其在細胞內的表達相對恒定,在處理因素作用條件下不會發生表達改變的基因。

2022-01-20

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“你們的內參加入提取嗎?”

“你說監控采樣和提取,怎么做到的?”

“這個內參檢測的是什么基因呀?”

……

自從伯杰帶有內參的新冠檢測試劑上市,關于內參的問題紛至沓來。那就讓我們一起來看一看內參為何方神圣吧!


1

---什么是內參?


內參,即是在檢測細胞內分子表達變化時選擇的參照物,其在細胞內的表達相對恒定,在處理因素作用條件下不會發生表達改變的基因。內參同樣可以校正上樣量、上樣過程中存在的實驗誤差,保證實驗結果的準確性。
2

---什么是內源性內參


內源性參照基因,也就是管家基因(持家基因,house keeping gene)。

管家基因是一類始終保持著低水平的甲基化并且一直處于活性轉錄狀態的基因,高度保守并且在大多數情況下持續表達。其表達水平受環境因素影響較小,而且是在個體各個生長階段的大多數,或幾乎全部組織中持續表達,或變化很小,因此常存在于生物細胞核的常染色質中。它的表達只受啟動序列或啟動子與RNA聚合酶相互作用的影響,而不受其他機制調節。

管家基因維持細胞最低限度功能所不可少的基因, 如編碼組蛋白基因、編碼核糖體蛋白基因、線粒體蛋白基因、糖酵解酶的基因等。這類基因在所有類型的細胞中都進行表達,因為這些基因的產物對于維持細胞的基本結構和代謝功能是必不可少的。

3

---伯杰新冠檢測試劑中的RNase P內參是什么?


RNase P,即為核糖核酸酶P,是由一條長鏈非編碼RNA和十個蛋白質亞基組成的核糖核蛋白質復合物,可作用于催化切割RNA。核糖核酸酶是人體內最重要的核酶之一,也是第一個被發現的蛋白質以外具有催化活性的生物大分子。
RNase P 作為人體的生理作用可以充分表現有機體的生命活動內部化學反應的有序性,核糖核蛋白復合體可以根據靶RNA設計的外部引導序列(EGS)能與靶RNA堿基互補結合,形成類似前體tRNA的二級結構,從而引導人類核糖核酸酶P對靶RNA進行特異切割。
4

---RNase P做內參有何優勢?


由于RNase P在人體各器官組織細胞中普遍存在,而且能夠對人體來源樣本的RNA核酸片段進行檢測,同時也可以作為內標結合使用,并監測整個實驗操作過程的準確性。
若熒光PCR平臺所顯示出的樣本反應曲線和內標反應曲線均不起跳,則說明采集到的樣本質量有可能出現問題(如咽拭子未刮到上皮細胞,采樣失?。?/span>或因為實驗操作不當(如保存、運輸不當,核酸提取過程RNA降解等)而出現假陰性,這需要引起操作者的注意。而RNase P內參可以對樣本的采集、運輸儲存、核酸提取等步驟起到監控的作用,保障了檢測結果的準確性。

現在,你是否更了解內源性內參了呢?

不同于外源性內參需要在提取時額外加入,并僅能監控提取過程;內源性內參無需額外加入,我們設計了擴增RNase P的引物探針,只要采樣、提取過程無問題,即可在ROX通道看到內參的擴增曲線。

是不是既簡便、又巧妙的設計呢?



伯杰醫療

上海伯杰醫療科技有限公司是一家致力于感染性病原體分子診斷試劑研發和應用,深耕于多重熒光 PCR 診斷試劑和痕量病毒二代測序試劑及相關服務的高新技術企業。公司圍繞感染性病原體這一主線,從診斷試劑、診斷儀器、測序服務和醫檢所服務等多個面提供全套解決方案。公司秉承“勇于創新,質量為先”的方針,為醫療機構、疾控公衛、高??蒲械群献骰锇樘峁﹥炠|產品與服務。

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