點擊上方“藍字”,發現更多精彩。
流感監控網絡實驗室常用MDCK細胞系來進行季節性流感病毒的分離,該細胞系是由Madin和Darby在1958年從美國Cocker Spaniel母曲架犬的腎臟組織分離培育出的,通常是以貼壁方式生長的上皮樣細胞。由于其病毒感染效率高,增值快,且不易變異,MDCK細胞系廣泛應用于多種病毒的分離培養,常被用于疫苗生產。
傳統的MDCK細胞系培養,采用有血清的貼壁細胞培養方式。然而血清成分復雜,含有對細胞有害的成分,后期產物分離純化難度大。另外,血清來源有限,價格昂貴,生產成本高;而且血清的質量因動物個體、血清產地、生產批號不同而產生波動,使得實驗和生產難以實現標準化。
通過對傳統MDCK細胞的無血清培養馴化,加上高表達的表面受體——α-2,6Gal Sa受體蛋白,可以使該細胞系與流感病毒表面HA基因更好地結合,達到高效分離流感病毒的目的。目前,懸浮細胞分離病毒已廣泛被使用。susMDCK懸浮細胞生長不依賴支持物表面,由于缺乏粘附分子的表達,在培養基中便自然呈現懸浮狀態。因此在細胞培養與傳代時,使用無血清培養液,并且只需要直接稀釋或離心稀釋,無需胰酶消化。相較于傳統MDCK貼壁細胞具有操作簡便,分離率高,分離周期短的優勢。
sus-MDCK懸浮細胞
分離病毒的優勢
細胞傳代——只需稀釋,無需胰酶消化,且無需牛血清,使用susMDCK懸浮細胞專用的M-SUS培養液即可;
標本接種——無需洗滌細胞,無病毒吸附過程,直接加入標本培養;
病毒收獲和鑒定——隨時可取出進行血凝試驗,若滴度小于8,則可以繼續培養,直到滴度滿足要求。
懸浮的susMDCK細胞通過增加病毒吸附表面積和流感病毒的受體,提高了吸附病毒的能力。對H1N1pdm09亞型和乙型流感病毒,尤其是對近年來因基因位點發生變異導致很難分離的季節性H3亞型流感病毒,分離培養的優勢十分顯著(如圖1)。
另外,與貼壁細胞相比可以顯著提高病毒分離培養的陽性率和病毒滴度(如圖2)。
圖1 H3N2懸浮細胞培養物的血凝實驗結果
圖2 兩種類型細胞對隨機樣本
分離培養陽性率的比較
高效分離流感病毒的
susMDCK懸浮細胞產品
為了更好的服務于流感病毒分離培養工作,上海伯杰醫療科技有限公司精心定制了不同的懸浮細胞產品,以滿足您的全方位需求!
方案一:流感病毒高效細胞分離培養試劑盒
一套囊括懸浮細胞培養所需儀器、試劑及耗材的實驗包
方案二:susMDCK懸浮細胞成品管
無需試劑耗材,可直接進行病毒分離培養。
回顧“病原監控專題丨甲型流感100多種病毒快速檢測方案”,伯杰擁有一支從事病原體檢測工作多年的專業技術團隊,并有強大的流感病毒基因數據庫的支持。
不僅為您開發了流感所有亞型熒光PCR核酸檢測試劑盒、流感監測多重組合方案等個性化服務,還為您開發了可以實現全方位檢測的甲型流感病毒所有亞型系列以及甲型流感病毒HxNy快速分型試劑盒,以滿足日常與應急工作需要。
流感常規檢測多重組合方案
我公司構建的病毒一代測序平臺,可開展季節性流感病毒四種亞型及禽流感病毒三種亞型的單個基因或全基因組一代測序。其它亞型流感病毒可提供定制測序服務。我公司現有illumina二代測序平臺,可實現對所有A型和B型流感病毒的全基因組測序。
上海伯杰醫療科技有限公司是一家致力于感染性病原體分子診斷試劑研發和應用,深耕于多重熒光PCR診斷試劑和痕量病毒二代測序試劑及相關服務的國家高新技術企業。公司圍繞感染性病原體這一主線,從診斷試劑、診斷儀器、測序服務和醫檢所服務等多個面提供全套解決方案。公司秉承“勇于創新,質量為先”的方針,為醫療機構、疾控公衛、高校科研等合作伙伴提供優質產品與服務。
全國客服電話:400-860-3688